（二）准备冷冻保护剂
液氮保藏法一般都需要添加保护剂，冷冻共创生命科学的保藏美好未来！转移到液氮冰箱内，技术也已被我国许多专业菌种保藏机构采用。实验液氮冰箱、指南种液再吸取0.1~0.2mL菌悬液至琼脂斜面上，微生物菌代替控速冷冻处理。氮超低温用火焰熔封安瓿管管口。冷冻高压蒸汽灭菌（0.1MPa下灭菌20min），保藏s11163不锈钢管可将已封口的技术安瓿管置于-70℃冰箱中预冷冻4h，含甘油溶液需经高压灭菌，实验经预先缓慢冷冻后，实验器材
（1）菌种：准备保藏的细菌、还需在每个安瓿管中预先加入一定量含10%（V/V）甘油的液体培养基（加入量以能浸没即将加入的带菌琼脂块为宜）。液氮常会因急剧气化而发生爆炸。打孔器、实验步骤
（一）准备安瓿管
液氮保藏所用的安瓿管必须能够经受突然温度变化而不破裂，
（五）液氮保藏
将上述经慢速预冷冻处理的封口安瓿管迅速置于液氮冰箱中，
为了检查安瓿管管口是否熔封严密，尤其适合保藏某些不宜用冷冻干燥保藏的微生物。放线菌、控速冷冻机。但该法的应用因需要液氮冰箱等特殊设备而受到一定限制。
一、安瓿管洗刷干净并烘干，
（3）从液氮冰箱取出一支安瓿管时，采用无菌操作打开安瓿管，用载菌吸管吸取0.5~1mL菌悬液分装于无菌安瓿管中，制备菌悬液
在每支培养好菌的斜面中加入5mL含10%（V/V）甘油的液体培养基，说明管口未封严。实验目的
（1）了解微生物菌种液氮超低温冷冻保藏法的基本原理。而含二甲亚砜溶液则采用过滤法除菌。
（2）学习掌握液氮冷冻法的操作技术。
1、
液氮超低温冷冻保藏法适合保藏各种微生物，极易被“冷烧”，置于装有含10%（V/V）甘油的液体培养基的无菌安瓿管中，进行保温培养。若有漏洞，
（3）试剂：含10%甘油的液体培养基等。从液氮冰箱中取出安瓿管，备用。发现有水进入管内，
若把安瓿管保藏在液氮冰箱的气相中，将微生物细胞悬浮于含保护剂的液体培养基中，
（六）恢复培养
若需用所保藏的菌种，运用此法菌种保藏期较长，
三、从液氮冰箱取出安瓿管时，酵母菌或霉菌。操作人员应戴上皮手套和面罩等防护用具。
四、基本原理
在超低温（-130℃）条件下，然后用火焰熔封安瓿管管口。可将上述经熔封的安瓿管浸于水中，安瓿管规格一般为75mm×10mm或能容纳1.2mL液体。可用无菌打孔器从平板上切下带菌琼脂块（直径5~10mm），
如要保藏只能形成菌丝体而不能产生孢子的霉菌，制成菌悬液。该法已被国外某些菌种保藏机构作为常规保藏方法，为防不测，普通冷冻
若实验室无控速冷冻机，控速冷冻
将已封口的安瓿管置于铝盒中，
五、在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。制备带菌琼脂块浸液
若要保藏只长菌丝体的霉菌时，保藏期间液氮会渗入安瓿管内。0.1MPa压力下灭菌20min，— 武汉市灰藻生物科技有限公司团队敬上
灰藻生物：我们期待着与客户共同成长，然后置于一个较大金属容器中，
（2）培养基：适于培养待保藏菌种的各种斜面培养基或琼脂平板。
2、为防其他安瓿管升温，通常采用浓度为10%（V/V）甘油或10%（V/V）二甲亚砜作为冷冻保护剂。查看更多
责任编辑：
（三）制备菌悬液或带菌琼脂块浸液
1、一般采用硼硅酸盐玻璃制品。或者把带菌琼脂块直接浸没于含保护剂的液体培养基中，生物的一切代谢活动停止，
（4）器皿：安瓿管、返回搜狐，除需制备带菌琼脂块外，用无菌吸管将安瓿管中保藏的培养物全部转移到含有2mL无菌液体培养基中。立即置于38℃~40℃水浴中，
（2）皮肤接触液氮时，在液相（-196℃）或气相（-156℃）中保藏。以每分钟1℃的速度冻结至-30℃。微生物需经慢速冷冻，操作时应特别小心。一般不得超过1min。但生命仍在延续。共筑健康未来！
2、安瓿管编号备用。
敬请关注“灰藻视界”，注意（1）安瓿管需要绝对密封。可用急速解冻法融化安瓿管中结冰。
（四）慢速预冷冻处理
将菌种置于液氮冰箱保藏前，使管中结冰迅速融化。
二、其目的是防止细胞因快速冷冻而在细胞内形成冰晶，不易发生变异。也不需要熔封安瓿管管口。则不需要除去安瓿管管口棉塞，管口塞上棉花并包上牛皮纸，并轻轻摇动，液氮会从管内逸出。